METODO DE DNS

PROPOSITO

El método DNS (ácido dinitrosalicilico) es una técnica colorimétrica que emplea un procedimiento que se basa en una reacción redox que ocurre entre el DNS y los azucares reductores presentes en la muestra, seguido de la determinación  espectrofotométrica a 540nm de los azucares reductores. Esta técnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos durante una fermentación o para cuantificar los productos de una reacción enzimática. Este método ha sufrido varias modicaciones a través de los años para adecuarse al análisis de diferentes materiales y su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un método espectrofotométrico.

ETAPAS

Cuantificación de azúcares reductores por el método de DNS

Este procedimiento se fundamenta en la reacción de los grupos reductores de los azúcares con el reactivo oxidante ácido dinitrosalicílico (DNS). El reactivo consiste en una disolución formada por los siguientes compuestos: ácido dinitrosalicílico (ácido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzóico), que actúa como oxidante; Sal de Rochelle (tartrato sódico-potásico), que impide la disolución de oxígeno en el reactivo y hidróxido sódico, que aporta el medio requerido para que se produzca la reacción redox. De esta forma, el ácido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzóico se reduce, en presencia del grupo reductor de la glucosa, formando el ácido 3-amino-5-nitrosalicílico, mientras que el grupo aldehído reductor se oxida, para formar un grupo carboxílico. En este método analítico el DNS está en exceso frente a los grupos reductores y en todas las muestras se adiciona la misma cantidad, de tal forma que mayores concentraciones de azúcares reductores provocan una mayor coloración de la muestra. Estas diferencias de coloración pueden determinarse por espectrofotometría visible, a la longitud de onda de máxima absorbancia de 540 nm.

Preparación del reactivo del ácido 3,5 dinitrosalicílico en caliente

Se pesan 5 g de ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS), 150 g de Tartrato de Na-K y 8 g de NaOH. Se disuelve el NaOH en 200 mL de agua destilada y se añade en agitación el Tartrato de Na-K lentamente.

Se completa con agua destilada hasta 400 mL y se comienza a añadir lentamente el ácido 3,5 dinitrosalicílico. Se deja en agitación toda la noche, se enrasa a 500 mL y se filtra. Se guarda en frasco color ambar, bajo refrigeración.

La preparación del reactivo DNS en caliente se hace con agitación magnética y calentamiento. 

ALCANCES Y LIMITACIONES 

 El método del DNS no es recomendable para la determinación de azucares reductores en muestras intensamente coloreadas como mieles y caldos de fermentación que la contengan. Estudios de 0tero y colaboradores muestran dispersión en la determinación de azúcares reductores en mieles por el método del DNS con la modificación de Miller

DNS reacciona únicamente con los azúcares reductores. La sacarosa es un disacárido no reductor, pero tras su hidrólisis en medio ácido se liberan glucosa y fructosa que sí son reductores y reaccionan con el DNS generando un producto coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por métodos espectrofotométricos es proporcional a la concentración de sacarosa.

FACTIBILIDAD

Lo suficiente útil  en el seguimiento y control del proceso de fabricación de azúcar y alcohol en la Industria sucro-alcoholera calcula la concentración de azúcares reductores en distintos materiales.

SUGERENCIAS

Para determinar la concentración de azucares reductores se debe realizar una curva de calibración o curva patrón que relacione sus concentraciones y antes puedes hacer una tabla de tus resultados.

CURVA PATRÓN

La curva de calibración es un método muy utilizado en química analítica para determinar la concentración de una sustancia (analito) en una muestra desconocida, sobre todo en disoluciones. El método se basa en la relación proporcional entre la concentración y una determinada señal analítica (propiedad)

En cuanto a la parte practica, la presencia de azucares reductores se puede evidenciar por el cambio de color amarillo a naranja o a rojo ladrillo.

La intensidad del color está relacionada con la concentración de azucares reductores en la muestra.

MEDIDAS DE HIGIENE

Como en todos los casos, para realizar cualquier método o practica se deben utilizar los materiales necesarios, limpios y secos; así como el respectivo equipo de protección.

Demostración.